В ЯКИЙ РОЗЧИН ТРЕБА ПОМІСТИТИ ШМАТОЧОК ВИДАЛЕНОЇ ТКАНИНИ НА ГIСТОЛОГIЧНЕ ДОСЛIДЖЕННЯ

В ЯКИЙ РОЗЧИН ТРЕБА ПОМІСТИТИ ШМАТОЧОК ВИДАЛЕНОЇ ТКАНИНИ НА ГIСТОЛОГIЧНЕ ДОСЛIДЖЕННЯ

Розчини для фіксації тканин з метою гістологічного дослідження

Для збереження морфологічної структури тканин, призначених для гістологічного дослідження, використовують різноманітні фіксуючі розчини. Вибір конкретного розчину залежить від типу тканини та методів дослідження, які планується провести.

Основні фіксуючі розчини

1. 10% формалін (нейтральний)

Нейтральний формалін є найпоширенішим фіксуючим розчином. Він готується шляхом розведення 100 мл формаліну (40% розчин формальдегіду) у 900 мл дистильованої води.

Формалін утворює ковалентні зв’язки з аміногрупами білків, що призводить до стабілізації тканини. Він добре зберігає основні клітинні компоненти, такі як ядро, цитоплазма та органели.

2. Розчин Буена

Розчин Буена складається з 15 мл крижаної оцтової кислоти, 75 мл насиченого водного розчину пікринової кислоти і 100 мл 95% етилового спирту.

Оцтова кислота та пікринова кислота денатурують білки та гальмують автоліз (самоперетравлення) тканин. Завдяки високому вмісту спирту розчин добре проникає у тканину та забезпечує її часткову зневоднювання.

3. Розчин Карнуа

Розчин Карнуа складається з 60 мл 95% етилового спирту, 30 мл крижаної оцтової кислоти і 10 мл хлороформу.

Етиловий спирт та оцтова кислота діють як у випадку розчину Буена. Хлороформ проникає у ліпіди клітинної мембрани, роблячи її більш проникною для фіксуючих речовин.

4. Реагент Ценкера

Реагент Ценкера складається з 5 г сульфату ртуті, 2,5 г сульфату натрію і 1 мл крижаної оцтової кислоти на 100 мл дистильованої води.

Цей розчин фіксує тканину шляхом преципітації білків. Однак він має корозійний характер і може спричиняти подразнення шкіри та дихальних шляхів.

5. Розчин Кларка

Розчин Кларка складається з 15 мл крижаної оцтової кислоти, 6 мл формаліну (40% розчин формальдегіду) і 100 мл 95% етилового спирту.

За своїм складом і властивостями розчин Кларка схожий на розчин Буена, але завдяки додаванню формаліну він забезпечує кращу фіксацію ядер та цитоплазми.

Вибір фіксуючого розчину

Вибір оптимального фіксуючого розчину залежить від кількох факторів:

* Тип тканини. Різні тканини мають різну структуру та хімічний склад. Деякі розчини краще фіксують м’які тканини, інші – тверді тканини.
* Методи дослідження. Вибір фіксуючого розчину залежить від передбачуваних методів дослідження. Наприклад, для імуногістохімічних досліджень необхідні фіксатори, які зберігають антигенну структуру тканини.
* Час фіксації. Чим товщі шматок тканини, тим більше часу потрібно для його фіксації. Середній час фіксації для розчинів формаліну становить 12-24 годин, для інших розчинів – від декількох годин до декількох діб.

Зневоднювання, прояснення та заливка тканин

Після фіксації тканина проходить етапи зневоднювання, прояснення та заливки. Зневоднювання проводиться послідовно в розчинах етилового спирту наростаючої концентрації (від 50 до 100%). Прояснення проводиться у розчині ксилолу (толуолу) або спеціальному прояснювальному засобі. Заливка проводиться у парафін або інший заливальний матеріал, який забезпечує твердість та можливість виготовлення тонких зрізів тканини для гістологічного дослідження.

Запитання 1:

У який розчин слід помістити шматочок видаленої тканини перед гістологічним дослідженням?

Відповідь:

Найпоширенішим розчином для фіксації тканинних зразків перед гістологічним дослідженням є 10% формалін. Формалін є розчином формальдегіду у воді, який сприяє стабілізації білків тканин, запобігаючи їхньому розкладу та зміні структури.

Запитання 2:

Скільки часу потрібно зберігати тканину в розчині формаліну?

Відповідь:

Для більшості тканинних зразків рекомендується фіксувати їх у 10% формаліні протягом 24-48 годин. Цього часу зазвичай достатньо для адекватної фіксації тканин.

Запитання 3:

Чи є альтернативні розчини для фіксації тканин?

Відповідь:

Так, існують альтернативні розчини для фіксації тканин, але їх використання залежить від конкретних потреб дослідження. Деякі альтернативні фіксатори включають:

  • Спирт (етиловий, метиловий)
  • Ацетон-формалін-оцтова кислота (АФОА)
  • Сулема (хлорид ртуті)

Запитання 4:

Який об'єм розчину формаліну потрібен для фіксації тканини?

Відповідь:

Загалом співвідношення тканини до формаліну має бути 1:10. Тобто на кожен 1 мл тканини необхідно використовувати 10 мл розчину формаліну.

Запитання 5:

Як довго можна зберігати зафіксовані в формаліні тканини?

Відповідь:

Правильно зафіксовані в формаліні тканини можуть зберігатися протягом тривалого часу. У відповідних умовах їх можна зберігати місяцями, а іноді і роками без значного погіршення якості.

admin

Website:

Leave a Reply

Ваша e-mail адреса не оприлюднюватиметься. Обов’язкові поля позначені *

Please type the characters of this captcha image in the input box

Please type the characters of this captcha image in the input box

Please type the characters of this captcha image in the input box

Please type the characters of this captcha image in the input box